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      LC液相色譜儀工作人員在遇到問(wèn)題時(shí)應采取的必要措施

      更新時(shí)間:2019-01-23      點(diǎn)擊次數:2633
         LC液相色譜儀不適用于溫度環(huán)境。通常,操作要求可在室溫5至35°C下滿(mǎn)足。通常,濕度環(huán)境需要為20%至85%。在高濕度區域,當使用某些類(lèi)型的氣相色譜儀時(shí),由于高環(huán)境濕度,氣相色譜儀的絕緣性能會(huì )降低,如果操作靈敏度高,響應值會(huì )降低。使用氣相色譜儀時(shí),工作人員在遇到上述現象時(shí)應采取必要措施。
       
        LC液相色譜儀系統由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統,樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動(dòng)時(shí),經(jīng)過(guò)反復多次的吸附-解吸的分配過(guò)程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,LC液相色譜儀被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出,通過(guò)檢測器時(shí),樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來(lái)液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統,下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)。
       
        選擇LC液相色譜儀入口和檢測器類(lèi)型的色譜柱尺寸和墊片材料;避免氣相色譜儀重復使用墊圈;使用合適的柱切割工具(如陶瓷板或金剛石切割刀)進(jìn)行柱切割;在將氣相色譜儀色譜柱安裝在進(jìn)樣口和檢測器中之前,確保色譜柱頭清潔平整;安裝氣相色譜儀制造商的要求,將色譜柱安裝插入入口和檢測器的適當距離;氣相色譜儀色譜柱必須放在色譜柱上,毛細管色譜柱的任何部分都不能接觸色譜柱的壁;確??鞠浼訜崆八薪宇^都沒(méi)有泄漏,載氣中不含氧氣;通過(guò)注射檢查L(cháng)C液相色譜儀色譜柱是否正確安裝,無(wú)需保留化合物或使用氣相色譜儀軟件程序,并設定載氣的線(xiàn)性流速。
       
        LC液相色譜儀的使用方法的具體步驟
       
        1、LC液相色譜儀它包括空柱和填料??罩莾缺趻伖獾牟讳P鋼管,內徑為4~5mm,長(cháng)100~250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈,用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中,用柱式機械往復泵輸入新鮮脫氣的流動(dòng)相。
       
        等基線(xiàn)平直后可用苯、萘、菲的混合試液,用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇:水(83:17)為流動(dòng)相測定柱效及分離度塔板數在2~3萬(wàn)/ml以上及分離度在1.5以上者,柱效好。為防止柱污染,常用1個(gè)50mm長(cháng),4~5mm內徑,裝有硅膠(40-50mm)或立柱相同填料的保護柱(預柱)接在主柱之前,以延長(cháng)色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經(jīng),以洗去鹽類(lèi)、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚,再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生。
       
        2、流動(dòng)相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動(dòng)相放于貯液瓶中,經(jīng)過(guò)有濾過(guò)頭、內徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱,zui后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動(dòng)相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法,即自洗脫開(kāi)始到結束,溶劑的配比恒定。
       
        另一類(lèi)為梯度洗脫法,即使溶劑的極性強度在色譜過(guò)程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比,從而使同一個(gè)試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過(guò)程中很好分離,而整個(gè)色譜過(guò)程縮短。必須注意,梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測的反相液相色譜法中。
       
        3、檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線(xiàn)吸收,熒光發(fā)射和電化學(xué)三種。紫外檢測器應用于對紫外光有吸收的藥物,大多數藥物分子對紫外光有吸收,故能較普遍采用,檢測限有0.1μg左右。紫外檢測器有固定波長(cháng)型、可變波長(cháng)型及掃描器,既能使流動(dòng)相停流作組分的定性定量檢測,又能提高測定靈敏度,重現性較好。熒光發(fā)射檢測器對能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。
       
        80年代應用激光替代氙燈光源,光強度增加了3~4倍,對某些藥物的檢測限可達pg級。電化學(xué)檢測器是由一個(gè)碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測兒茶酚胺類(lèi)及有酚類(lèi)基團的各種藥物和代謝物。流出組分進(jìn)入2μl的薄層電解池,在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流,放大后檢測,檢測限pg級。
       
        4、數據處理現代液相色譜儀帶有數據處理系統,除記錄譜外,還能自動(dòng)記錄峰的保留時(shí)間,能自動(dòng)積分求算峰面積,并能按照預定的程序作有關(guān)計算,報告分析結果。
       
        LC液相色譜儀的要求
       
        1、流動(dòng)相必須用HPLC級的試劑,使用前過(guò)濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45μm或更細的膜過(guò)濾)。
       
        2、流動(dòng)相過(guò)濾后要用超聲波脫氣,脫氣后應該恢復到室溫后使用。
       
        3、不能用純乙腈作為流動(dòng)相,這樣會(huì )使單向閥粘住而導致泵不進(jìn)液。
       
        4、使用緩沖溶液時(shí),做完樣品后應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時(shí),然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上,以充分洗去離子。對于柱塞桿外部,做完樣品后也必須用去離子水沖洗20mL以上。
       
        5、長(cháng)時(shí)間不用儀器,應該將柱子取下用堵頭封好保存,注意不能用純水保存柱子,而應該用有機相(如,甲醇等),因為,純水易長(cháng)霉。
       
        6、LC液相色譜儀每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。
       
        7、C18柱不能進(jìn)蛋白樣品,血樣、生物樣品。
       
        8、堵塞導致壓力太大,按預柱→混合器中的過(guò)濾器→管路過(guò)濾器→單向閥檢查并清洗,清洗方法:
       
       ?、僖援惐甲魅軇_洗;
       
       ?、诜旁诋惐贾虚g用超聲波清洗;
       
       ?、塾?0%稀硝酸清洗;
       
        9、氣泡會(huì )致使壓力不穩,重現性差,所以在使用過(guò)程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。
       
        10、如果進(jìn)液管內不進(jìn)液體時(shí),LC液相色譜儀要使用注射器吸液:通常在輸液前要進(jìn)行流動(dòng)相的清洗。
       
        11、LC液相色譜儀要注意柱子的pH值范圍,不得注射強酸強堿的樣品,特別是堿性樣品。
       
        12、更換流動(dòng)相時(shí)應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動(dòng)邊靖洗,然后插入新的流動(dòng)相中。更換無(wú)互溶性的流動(dòng)相時(shí)要用異丙醇過(guò)渡一下。
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